ELISA tests atklāj daudzas slimības, tāpēc tas ir plaši izmantots medicīnā un ne tikai. Tomēr ELISA tests ir vislabāk pazīstams ar Laima slimības diagnozi. Kas ir ELISA tests? Kā interpretēt rezultātus? Kāda ir testa cena?
Satura rādītājs:
- ELISA tests - ko tas atklāj? ELISA testa piemērošana
- ELISA tests - kāds ir tests?
- ELISA tests un Laima slimība - kad veikt?
- ELISA tests - cena. Cik maksā ELISA tests?
- ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini pozitīvi?
- ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini negatīvi?
ELISA tests, t.i., ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests ir parasti izmantota laboratorijas metode, kas cita starpā kalpo: antivielu kvantitatīvai noteikšanai asinīs.
Šī iemesla dēļ ELISA tests ir izmantots baktēriju slimību, piemēram, Laima boreliozes, diagnostikā.
ELISA metodes priekšrocība ir tās vienkāršība un ātras ieviešanas iespēja, kā arī augsta jutība. ELISA metodi veic, izmantojot īpašas plastmasas plāksnes ar iedobēm, kas piepildītas, piemēram, ar Borrelia olbaltumvielām (antigēniem) un specifiskām monoklonālām antivielām, kas paredzētas antivielu noteikšanai pacienta paraugā.
ELISA tests - ko tas atklāj? ELISA testa piemērošana
ELISA metodes augstā jutība un vienkāršība padarīja to piemērojamu daudzu slimību diagnostikā, taču tā ir vislabāk pazīstama kā Laima slimības diagnostikas metode.
Laima boreliozes diagnozes gadījumā tiek saukts t.s. netiešā ELISA, kas ļauj pārbaudītajā materiālā noteikt specifisku IgM vai IgG. Tādā pašā veidā diagnozes noteikšanai var noteikt antivielas:
- vīrusu infekcijas: herpes vīrusi (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovīruss), HIV, hepatīta vīrusi (HBV un HCV)
- vienšūņu infekcijas: toksoplazmoze, giardiasis
- autoimūnas slimības: celiakija (anti-tTG vai anti-DPG antivielas), Hašimoto slimība (anti-TG un anti-TPO antivielas), zarnu iekaisuma slimības (anti-ASCA un anti-ANCA antivielas)
- parazitāras slimības un alerģijas, kurās tiek noteiktas specifiskas IgE antivielas. To paaugstinātais līmenis var liecināt par alerģiju klātbūtni, piemēram, ziedputekšņiem un pārtiku, vai parazītu invāzijām (bruņots lentenis, cilvēka apaļtārps).
Ir arī ELISA metodes modifikācijas (tā sauktā sendviča ELISA), kas ļauj noteikt citu olbaltumvielu paraugu, nevis antivielas. Tad testa mērķis ir noteikt bioloģiskajā materiālā:
- vīrusu vai baktēriju fragmenti, visbiežāk tie ir antigēni, kas raksturīgi konkrētam patogēnam
- seruma hormoni, piemēram, estrogēns, prolaktīns, TSH, fT4, kortizols
- fermenti, piemēram, kalprotektīns, aizkuņģa dziedzera elastāze, sārmainā fosfatāze
- audzēja marķieri, piemēram, CA-125
- zāļu klātbūtne serumā
Šī metode ir piemērojama arī pārtikas rūpniecībā, kur tā var atklāt alergēnu (piemēram, piena, zemesriekstu), ĢMO vai toksīnu pēdas pārtikā.
ELISA tests - par ko tas ir?
Piemēram, Laima boreliozes diagnostika, izmantojot ELISA metodi, ir imūnproteīnu noteikšana bioloģiskajā materiālā - antivielās, kas rodas reakcijas laikā pret Borrelia antigēniem.
Antivielas tiek pārbaudītas divās klasēs - IgM un IgG. IgM ir pirmās antivielas, kas organismā parādās, nonākot saskarē ar baktērijām, un laika gaitā tās samazinās.
Viņu vietu aizņem noturīgākas IgG antivielas, kas organismā var palikt vairākus desmitus gadus.
Tādā veidā baktēriju klātbūtne organismā tiek netieši pārbaudīta, atklājot antivielas, kas īpaši vērstas pret Borrelia spirochetes.
Antivielas dažādos infekcijas posmos var būt vērstas pret dažādiem Borrelia proteīniem. Piemēram, agrīnā stadijā tas ir p41 proteīns.
Vēlākajos posmos sāk parādīties arvien vairāk olbaltumvielu, piemēram, p21, p30, p39, p43. Tas ir iemesls, kāpēc Laima slimības diagnosticēšana ir ārkārtīgi sarežģīta.
Baktēriju olbaltumvielu atlase ir ārkārtīgi svarīga, lai testam būtu augsta diagnostiskā vērtība. Tāpēc, regulāri diagnosticējot Laimas slimību, jāizmanto II vai III paaudzes ELISA testi, kuros izvēlas olbaltumvielu kopas, lai iegūtu visticamāko rezultātu.
ELISA tests un Laima slimība. Kad darīt?
Laima borelioze ir baktēriju slimība, ko izraisa Borrelia burgdorferi baktērijas un tās daudzās šķirnes.
Slimības diagnosticēšana nav vienkārša imūnās atbildes pret Borrelia sarežģītības un laboratorijas metožu nepilnību dēļ.
Visbiežāk izmantotā laboratorijas metode ir ļoti jutīga ELISA metode, kas nosaka specifiskas antivielas, kas radušās pret baktēriju olbaltumvielām.
Laima boreliozes diagnostikā tiek izmantota netieša ELISA metode, kurā izšķir šādus posmus:
- iedobju inkubēšana uz plāksnes ar materiālu, kas savākts no pacienta, piemēram, serumu. Ja pārbaudītajā materiālā ir antivielas pret Borrelia, tās labi saistās ar olbaltumvielām reakcijas apakšā
- tad lieko serumu izskalo ar speciālu mazgāšanas šķidrumu (buferšķīdumu) un t.s. konjugāts, kas ir ar fermentiem saistīta antiviela, kas reakcijas iedobēs saistās ar iepriekš saistītām antivielām
- tad pievieno konjugāta substrātu un notiek krāsu reakcija (pozitīvs rezultāts) vai nav krāsu reakcijas (negatīvs rezultāts)
- pēdējais solis ir lasītāja nolasījums (spektrofotometrs) antivielu pret Borrelia koncentrāciju pacienta serumā
Laima slimības ELISA testu veic no asinīm, neiroloģisko simptomu (neiroborreliozes) gadījumā - arī no cerebrospinālajiem šķidrumiem.
Sinoviālā šķidruma pārbaude nav jāveic, jo pastāv liela kļūdaini pozitīvu rezultātu iespējamība.
Slimības diagnostikas pamats ir klīniskie simptomi, kas to norāda, apstiprina laboratorijas testu rezultāti.
Laboratorijas testa rezultātu pievienošana bez simptomiem neļauj diagnosticēt Laima slimību, jo ir pierādīts, ka antivielas pret Borrelia tiek atklātas arī veseliem cilvēkiem.
Laima boreliozes seroloģiskā diagnostika sākas ar daļēji kvantitatīvu skrīninga ELISA testu. Ja rezultāts ir negatīvs, tas nozīmē, ka nav atklāti Borrelia spirochetes vai rezultāts ir kļūdaini negatīvs.
Ja rezultāts ir pozitīvs vai vāji pozitīvs (nepārprotams), jāveic apstiprinoša Western blot pārbaude, kurai raksturīga augsta specifika.
Tas apstiprina, ka ELISA rezultāti ir "patiesi". Diagnostikas laikā jūs nevarat izlaist nevienu no iepriekš minētajām darbībām un, piemēram, nekavējoties veikt diagnozi, izmantojot Western blot metodi, vai veikt diagnozi, pamatojoties tikai uz pozitīvu ELISA rezultātu.
Polijā Laima slimības diagnoze ļoti bieži beidzas pirmajā skrīninga posmā, kas izraisa nepareizu pozitīvu vai vāji pozitīvu rezultātu interpretāciju.
Ieteicamais raksts:
Limfocītu transformācijas tests (LTT) Labi zinātELISA tests - cena. Cik maksā ELISA tests?
Pārbaude maksā apmēram PLN 60 un tiek veikta uzreiz. Tomēr nodošanas rezultātus var gaidīt apmēram trīs mēnešus.
ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini pozitīvi?
Nepatiesi pozitīvi rezultāti rodas IgM antivielu savstarpējās reaktivitātes rezultātā ar citiem proteīniem. Ķermeņa ražotās antivielas var “nepareizi” atpazīt antigēnu no citiem mikroorganismiem kā Borrelia antigēnu.
Visizplatītākās "kļūdas" rodas cilvēkiem, kuri inficēti ar treponema pallidum (latīņu: Treponema pallidum), herpes vīrusiem, kā arī cilvēkiem ar sistēmisku sarkano vilkēdi un citām reimatiskām slimībām.
ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini negatīvi?
Agrīnā infekcijas stadijā var parādīties kļūdaini negatīvi rezultāti, pēc tam tests jāatkārto apmēram pēc 3-4 nedēļām. To sauc seroloģiskais logs, tas ir sākotnējais infekcijas periods, kurā ķermenis vēl nav "paspējis" radīt specifiskas antivielas.
Tas pats attiecas uz cilvēkiem ar imūndeficītu, kuri neražo pietiekami daudz antivielu.
Liela problēma, īpaši ļoti intensīvu infekciju gadījumā, ir tā saukto parādīšanās imūnkompleksi, kas sastāv no Borrelia spirochetes antigēniem un tiem specifiskām antivielām.
Tā rezultātā antivielas kļūst "neredzamas" tādām bieži lietotām metodēm kā ELISA, un, lai arī tās ir pārbaudītajā materiālā, tās nevar noteikt.
Šādos gadījumos laboratorija var izmantot imūnkompleksu noārdīšanu. Šī ārstēšana ir paredzēta antivielu izdalīšanai. Tomēr šī metode netiek plaši izmantota, jo laboratorijās nav standartizācijas.
Vērts zinātKāpēc Laima slimības diagnostika nav viegla?
Tas ir saistīts ar imūnās atbildes pret Borrelia sarežģītību un laboratorijas metožu ierobežojumiem. Šķirņu daudzveidība un jaunu, infekciju izraisošu šķirņu parādīšanās, īpaši Eiropas kontinentā, neveicina efektīvu diagnostikas metožu izstrādi.
Nesen Eiropā parādījās vairāk šķirņu, piemēram, Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana un Borrelia spielmanii. Turklāt organismā Borrelia spirochetes var pārvērsties cistās vai palikt ķermeņa vietās, kas nav pieejamas imūnsistēmas šūnām.
Būt tādam "neredzamam" imūnsistēmai. Turklāt ir pierādīts, ka audos var būt baktēriju fragmenti, kuriem ir izteikti iekaisumu veicinošas īpašības. Tiek uzskatīts, ka viņi ir atbildīgi par Laimas slimības hroniskajiem simptomiem, neskatoties uz negatīviem laboratorijas testu rezultātiem.
Literatūra
1. Witecka-Knysz E. et al. Laima slimība: kāpēc diagnoze ir tik sarežģīta? Laboratorijas diagnostikas ārsts 2007. gada aprīlī.
2. Moore A. et al. Pašreizējās vadlīnijas, kopējās klīniskās kļūmes un turpmākie norādījumi par Laimas slimības laboratorisko diagnostiku, Amerikas Savienotās Valstis. Avārijas infekcijas dis. 2016. gada jūlijs; 22 (7).
3. Ērču pārnēsātu slimību laboratoriskā diagnostika. Darba grupas ieteikumi: Nacionālā laboratorijas diagnostikas kamera, Nacionālais sabiedrības veselības institūts - Nacionālais higiēnas institūts, Nacionālais konsultants infekcijas slimību jomā, Bjalistokas Medicīnas Universitātes Infektoloģijas un neiroinfekciju departaments, Polijas Viroloģijas biedrība, Varšava 2014
4. Hosseini S. et al.: Enzīmiem saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA) no A līdz Z. Springer 2017.
